ОБЩИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ИФА - НАБОРОВ

1. Не используйте компоненты набора с истекшим сроком годности. Набор следует хранить при температуре +(2-8)оС. Замораживание компонентов набора не допускается.

2. Компоненты набора и исследуемые образцы перед использованием необходимо выдержать при комнатной температуре +(18-25)оС в течение не менее 30 мин.

3. Во избежание конденсации влаги внутри лунок стрипов не извлекайте планшет из пакета, пока его температура не достигнет комнатной. Неиспользованные стрипы заклейте прилагающейся пленкой, вложите в пакет и храните его при температуре +(2-8)°С.

4. Перед использованием тщательно перемешайте реагенты во флаконах с помощью вортекса. Отбирайте из флаконов только необходимое количество реагентов. Никогда не сливайте излишки реагентов обратно во флаконы во избежание контаминации. Закрывайте каждый флакон своей крышкой.

5. Избегайте перекрестного загрязнения реагентов. Для каждого реагента и исследуемого образца используйте новые сменные наконечники. Мойте руки до и после использования реагентов. Перекрестное загрязнение реагентов и/или образцов может привести к получению ложных результатов.

6. Прежде, чем начать исследование, убедитесь в том, что все реагенты и исследуемые образцы подготовлены. Для получения надежных и стабильных результатов процесс исследования следует проводить от начала и до конца без перерывов.

7. Вносите реагенты как можно ближе ко дну лунки, но не касаясь наконечником поверхности, чтобы не повредить покрытия лунок.

8. Соблюдайте указанные в инструкции режимы инкубации и промывки. Воспроизводимость в любом иммуноферментном анализе зависит от точности пипетирования, соблюдения времени и температуры инкубации, последовательности и количества промывок.

9. Качество промывки имеет решающее значение для правильности получаемых результатов. Во время промывки следите, чтобы все лунки заполнялись буфером до одного уровня, и чтобы жидкость полностью удалялась из лунок. Не допускайте высыхания лунок между операциями, вносите реагенты в лунки сразу же после завершения промывки.

10. При ручной промывке промывайте лунки не менее трех раз (в ряде наборов до 5 раз), а при автоматической – до пяти раз. После промывки (вручную или автоматической) тщательно удаляйте остатки промывочного буфера из лунок, постукивая перевернутым планшетом о фильтровальную бумагу или марлевую салфетку. Остатки жидкости (>10 мкл), скапливающейся в лунках после промывки, могут повлиять на субстратную реакцию и привести к получению заниженных значений оптической плотности.

11. Неправильная промывка (например, менее 3 промывочных циклов, недостаточные объемы промывочного буфера в лунке) может привести к завышенным значениям оптической плотности. При использовании автоматического промывочного устройства для планшетов следите за тем, чтобы промывочное устройство подходило для планшетов данного типа.

12. Конъюгат, а затем раствор субстрата и стоп-реагент вносить в лунки планшета с той же скоростью и в той же последовательности, что и калибровочные пробы, контрольную сыворотку и исследуемые образцы. Это необходимо для соблюдения примерно равного времени реакции во всех лунках.

13. Избегайте попадания прямых солнечных лучей на планшет во время работы. Во избежание испарения (и, как следствие, «краевого эффекта») рекомендуется при инкубации закрывать планшет крышкой или заклеивать пленкой для заклеивания планшетов (кроме инкубации с раствором субстрата).

14. Инкубацию с раствором субстрата следует проводить в темноте. Раствор субстрата чувствителен к свету, его следует предохранять от воздействия прямых солнечных лучей, чтобы не допустить окрашивания из-за аутоокисления. Флакон с раствором субстрата следует закрывать сразу после использования. Если раствор субстрата ТМБ во флаконе приобрел голубую окраску (исходно он бесцветен), он становится непригодным для использования. Ванночка для субстратного раствора не должна использоваться под другие реагенты.

15. После добавления стоп-реагента в лунку с субстратным раствором смесь реагентов рекомендуется осторожно перемешать на шейкере или легким постукиванием по ребру планшета. Если в лунках после добавления стоп- реагента образовались пузырьки воздуха, перед проведением измерения на спектрофотометре осторожно удалите эти пузырьки запаянным или загнутым кончиком наконечника.

16. Связывание антител и конъюгатов, а также активность фермента пероксидазы температурно-зависимы, поэтому значения оптических плотностей могут колебаться, если не используется термостат. Оптимальная комнатная температура при иммуноферментном анализе +(22–24)оС. Сходные колебания связаны и с изменением времени инкубации.

17. Используйте специальные крышки или вложенные в набор клеящиеся пленки для защиты содержимого лунок планшетов от испарения в процессе инкубации и предотвращения «краевых эффектов».

18. Используйте только дистиллированную или деионизованную воду и химически чистую стеклянную посуду.

19. Пользуйтесь только аттестованными по объему средней дозы и сходимости результатов пипетирования полуавтоматическими пипетками (отклонение не более 3%).

20. Своевременно поверяйте термостат и спектрофотометр для получения надежных результатов. 21. Избегайте попадания стоп-реагента, содержащего серную кислоту, в глаза, на кожу и слизистые оболочки. Если это все же произошло, промойте пораженный участок большим количеством проточной воды.

22. Не дозируйте реагенты и исследуемые образцы ртом, избегайте их попадания на кожу и слизистые. При работе с компонентами набора или с образцами всегда надевайте одноразовые перчатки, тщательно мойте руки сразу после окончания работы. Избегайте любого разбрызгивания реагентов и образцов!

23. Набор представляет собой единое целое. Не допускается использование компонентов наборов разных серий и реагентов других фирм.